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液相色谱质谱联用仪之游刃有余
发布时间2019-07-05 浏览次数：136
、水相中的溶质溶解方式
水相中需溶解的无机盐和表面活性剂等固体溶质，强烈建议采用加热法，不建议采用振摇、超声等方式。因此种方式的溶解，溶质可能处于“临界胶团浓度”，其后旦遇到某特殊情形（如遇有机溶剂、温度剧降等），易析出少量结晶；而旦析出，便将损伤仪器和色谱柱，呈现泵头处析出“盐和白粉”的现象。
二、流动相的配制与使用
1、 恒度洗脱
定是将水相与有机相混合后、抽滤（使用混合型过滤膜），用个管路（如A 管）泵入仪器，这是使用的个原则性问题！切勿因节约有机相、便于摸索色谱条件等原因而使用两个管路（个纯水相、个纯有机相）抽入仪器，即便配制了脱气机。因此种情形易成水相中的盐和表面活性剂少量析出。
剩余流动相可继续使用，密封后放置阴凉处；待下次试验时与新配制的流动相混合后抽滤即可。无需担心发霉、无机盐析出、挥发、比例不准等问题，这些皆为疑神疑鬼。实践是检验真理的标准！实践吧~
2、 梯度洗脱
流动相配制zui为科学的方式是：A 相为比例的水相-低比例的有机相、B 相为低比例的水相-比例的有机相（英药典几乎均如此）；其次为：A 相为比例的水相-低比例的有机相、B 相为纯有机相；zui不科学的为：A 相为纯水相、B 相为纯有机相，如既有质量标准采用了此种方式，强烈建议改为二种或种方式，否则基线漂移严重，难以行稳定的杂质检测。
梯度洗脱结束后，强烈建议经 5 分钟回到初始状态，再平衡5 分钟后开始下针测定。这10 分钟的稳定为关键。切勿短时间内回到初始状态，此举对仪器损伤较大。
三、色谱柱的安装
标准 SOP 应为：取A 管路放入流动相瓶中→ 拧松泵头 → 流速由 0ml/min 逐升至10ml/min，观察尾液是否呈瀑布状流出，持续10 秒→ 拧紧泵头 → 流动相呈抛射状从安装色谱柱的端喷出，观测是否呈抛物线状，持续5 秒→ 流速逐降至 1、0ml/min → 安装色谱柱，待20 秒后，流动相从色谱柱另端呈泉水状涌出，安装另头→ 手握两端，拧紧。
以上安装顺序遵循的是：逐排放气泡和仪器内存留的洗液，使得安装后气泡难混入。
本人曾试验梯度洗脱连续周，针与zui后针主成分保留时间相差在6 秒以内。
四、试验后色谱柱的清洗
1、 zui为常用的C8 柱、C18 柱
1、1 流动相仅为乙腈-水或甲醇-水时
继续冲洗 30 分钟，流速1、0ml/min，柱温保持试验时温度，即可。
1、2 水相中有无机盐、表面活性剂或三乙胺、氯酸等物质时采用纯水（或含有2%甲醇），冲洗A 管路（试验采用哪个管路，就要从头到尾冲洗该管路），时间30 分钟（如流动相中有表面活性剂，适当增加时间），流速1、0ml/min，柱温可较试验温度出5~10℃；随后更换成20%甲醇再冲洗30 分钟，流速1、0ml/min，柱温箱加热装置关闭。结束后取下色谱柱放置阴凉处。
很多同仁其后采用比例的甲醇冲洗，实属画蛇添足，导致残余的有机相中水相遇到比例的甲醇后析出少量盐和表面活性剂，从而在泵头上、色谱柱中析出，也导致了色谱柱寿命大为缩短。本人曾使用过根约2000 元的色谱柱，正着用了四年、倒着用了两年（倒着用测非有关物质）。
2、 其他类型色谱柱
查询获取如何科学合理地使用与清洗保存该类型色谱柱的方法，切勿盲动，否则导致色谱柱性能急剧下降。
五、试验顺序
作流程应如下行：
(1) 0~2 小时配制流动相、对照品和供试品溶液等，切勿催促昨日试验同事。
(2) 2~3 小时采用 A 管路注入流动相（B、C、D 管路从来不用，除非梯度洗脱才用到B 管路），平衡1 小时。如流动相中有表面活性剂，建议前晚小流速过夜，二天上班后将流速增至 1、0ml/min，平衡1 小时后即可开始做试验。
(3) 3~5 小时测定空白溶剂，定要做到基线不漂移后方可开始测定。所谓“不漂移”，通常系以1、0%自身对照溶液主成分峰约20%度来设定的视野范围观察所得，切不可设定得过小，使得杂质峰显得很突兀、基线抖动得很厉害，弄得人很担心。
(4) 5~8 小时配制所有样品，预试了对照溶液和供试品溶液，设定好自动样程序，程序zui后针设定为小流速过夜，紫外灯关闭。切勿设定为切换成B 管路洗脱，此举得不偿失！
(5) 8~24 小时放心回家，让仪器自动样，除非不稳定的样品（配制份测定针）。充分利用下班后的16 小时，做到从容不迫、镇定自若。如单位还无自动样装置，强烈建议向导申请购买，因台自动媲美三台手动。
(6) 二天0~0、5 小时检查并计算昨晚试验结果，如发现不良记录，将流速增至1、0ml/min，平衡30 分钟后，测定重新配制的该份样品即可（同时回校对照针）。无需重新测定，不要过度谨小慎微。
(7) 二天0、5~2、0 小时如上冲洗色谱柱，交给其后试验同事。
六、液相软件的使用
现今几大主流的硬件性能已相差无几，主要还是软件的设计是否能使操作者得心应手、随心所欲。
强烈建议掌握各软件的批处理、编辑样品处理模板等能，做到劳逸，让软件充分为作所用。
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